9. 1. 115 管法

将样品充分混匀后，在5支装有已火菌的5ml倍乳糖蛋日陈培养基（6.2）的试管中 （内有倒管），按无菌操作要求各加入样品10ml，在5支装有已灭菌的10ml单倍乳糖蛋白 陈培养基（6.1）的试管中（内有倒管），按无菌操作要求各加入样品1ml，在5支装有已灭 菌的10ml单倍乳糖蛋白陈培养基（6.1）的试管中（内有倒管），按无菌操作要求各加入样 品0.1ml。 对于受到污染的样品，先将样品稀释后再按照上述操作接种，以生活污水为例，先将样 品稀释104倍，然后按照上述操作步骤分别接种10ml、1ml和0.1ml。15管法样品接种量 参考表见表1。 当样品接种量小于1m时，应将样品制成稀释样品后使用。按无菌操作要求方式吸取 0ml充分混匀的样品，注入盛有90ml无菌水（6.4）的三角烧瓶中，混匀成1:10稀释样品 吸取1:10的稀释样品10ml注入盛有90ml无菌水的三角烧瓶中，混匀成1:100稀释样品。 其他接种量的稀释样品依次类推。 注：吸取不同浓度的稀释液时，每次必须更换移液管。 生活饮用水等清洁水体也可使用12管法

供暖标准表115管法样品接种量参考表

9. 1. 212 管法

将样品充分混匀后，在2支装有已灭菌的50ml三倍乳糖蛋白陈培养基（6.2）的大试管 中（内有倒管），按无菌操作要求各加入样品100ml，在10支装有已灭菌的5ml三倍乳糖 蛋白陈培养基（6.2）的试管中（内有倒管），按无菌操作要求各加入样品10ml

将接种（9.1）后的试管，在37℃土0.5℃下培养24h土2h。 发酵试管颜色变黄为产酸，小玻璃倒管内有气泡为产气。产酸和产气的试管表明试验阳 性。如在倒管内产气不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为阳性

轻微振荡在初发酵试验（9.2）中显示为阳性或疑似阳性（只产酸未产气）的试管，用 经火焰灼烧灭菌并冷却后的接种环（7.5）将培养物分别转接到装有EC培养基（6.3）的试 管中。在44.5℃土0.5℃下培养24h土2h。转接后所有试管必须在30min内放进恒温培养箱 或水浴锅（7.3）中。培养后立即观察，倒管中产气证实为粪大肠菌群阳性。

9.4.2阳性及阴性对照

要用无菌水（6.4）按照步骤9.1～9.3进行实验室

将粪大肠菌群的阳性菌株（如大肠埃希氏菌Escherichiacoli）和阴性菌株（如产气肠 菌Enterobacteraerogenes）制成浓度为3003000MPN/L的菌悬液，分别取相应体积的菌 悬液按接种（9.1）的要求接种于试管中，然后按初发酵试验（9.2）和复发酵试验（9.3）要 求培养，阳性菌株应呈现阳性反应，阴性菌株应呈现阴性反应，否则，该次样品测定结果无 效，应查明原因后重新测定，

接种12份样品时，查附录A中表A.1可得每升粪大肠菌群MPN值。 接种15份样品时，查附录A中表A.2得到MPN值，再按照公式（1）换算样品中粪大 场菌群数（MPN/L）：

MPN值×100 C:

式中：C一 二样品中粪大肠菌群数，MPN/L； MPN值一一每100ml样品中粪大肠菌群数，MPN/100ml； 100—为10×10ml，其中，10将MPN值的单位MPN/100ml转换为MPN/L，10ml 为MPN表中最大接种量 f一实际样品最大接种量，ml。

测定结果保留至整数位，最多保留两位有效数字，当测定结果≥100MPN/L时，以科学

计数法表示；当测定结果低于检出限时，12管法以“未检出”或“<3MPN/L”表示；15 管法以“未检出”或“<20MPN/L”表示。粪大肠菌群检验记录及报告推荐格式参见附录 B

6个实验室对低浓度（地下水，浓度均值为54MPN/L）、中浓度（地表水，浓度均值 为2.7×104MPN/L）和高浓度（生活污水，浓度均值为2.8×107MPN/L）三个不同浓度粪 大肠菌群的实际样品和有证标准样品（浓度为3670MPN/L，可接受范围为330 7710MPN/L）进行了6次重复测定：实验室内相对标准偏差范围分别为2.3%～3.8%、2.0% 1%、1.1%～5.4%和5.1%~17%；实验室间相对标准偏差分别为3.4%、11%、1.6%和5.4%； 实验室间95%置信区间见表2。

表2实验室间95%置信区间

12质量保证和质量控制

更换不同批次培养基时要进行阳性和阴性菌株检验，将粪大肠菌群的阳性菌株（如大肠 埃希氏菌Escherichiacoli）和阴性菌株（如产气肠杆菌Enterobacteraerogenes）制成浓度为 300～3000MPN/L的菌悬液。若使用的是定性标准菌株，配制方法为先进行预实验，摸清浓 度后按目标为300～3000MPN/L稀释；若使用的是定量标准菌株，则可按照给定值直接稀 释。稀释后分别取相应水量的菌悬液按接种（9.1）的要求接种于试管中，然后按初发酵试 验（9.2）和复发酵试验（9.3）要求培养，阳性菌株应呈现阳性反应，阴性菌株应呈现阴性 反应

12. 2. 1空自对照

每次试验都要用无菌水做实验室空百测定（9.4.1），培养后的试管中不得有任何变色反 应。否则，该次样品测定结果无效，应查明原因后重新测定

12. 2. 2阳性及阴性对照

定期按照9.4.2进行阳性及阴性对 株应呈现阳性反应，阴性菌株应呈现 阴性反应，否则园林绿化标准规范范本，该次样品测定结果无效，应查明原因后重新测定。

使用后的废物及器皿须经121℃高压蒸汽灭菌30min或使用液体消毒剂（自制或市售） 灭菌。灭菌后，器血方可清洗，废物作为一般废物处置。

附录A （资料性附录） 最大可能数（MPN）表

表A.112管法最大可能数（MPN）表

注：接种2份100ml样品，10份10ml样品，总量

表A.215管法最大可能数（MPN）表

注1：接种5份10ml样品、5份1ml样品、5份0.1ml样品。 注2：如果有超过三个的稀释度用于检验，在一系列的十进稀释当中，计算MPN时，只需要用其中依次三个 的稀释度，取其阳性组合。选择的标准是：先选出5支试管全部为阳性的最大稀释(小于它的稀释度也全部为 阳性试管)检测试验，然后再加上依次相连的两个更高的稀释。用这三个稀释度的结果数据来计算MPN值。

生1：接种5份10ml样品、5份1ml样品、5份0.1ml样品。 主2：如果有超过三个的稀释度用于检验，在一系列的十进稀释当中，计算MPN时，只需要用其中依次三个 的稀释度，取其阳性组合。选择的标准是：先选出5支试管全部为阳性的最大稀释(小于它的稀释度也全部为 阳性试管)，然后再加上依次相连的两个更高的稀释。用这三个稀释度的结果数据来计算MPN值。

附录B（资料性附录）粪大肠菌群检验记录及报告推荐格式表B.1粪大肠菌群测定检验记录项目名称：检验日期：年月日检验方法方法依据灭菌锅型号出厂编号培养箱型号出厂编号培养基灭菌温度（℃）培养温度（℃）样品编号：查表结果：粪大肠菌群数MPN/100 ml稀释度：结果：MPN/L标本接种（ml)初发酵复发酵阳性管数（个）检验者：校对：审核：注1：初发酵和复发酵后面的表格里，产酸产气的用“+”表示，否则用“一”表示。注2：可根据实际工作需要自行设计表格，至少要包括上述信息。表B.2粪大肠菌群测定数据报告样品来源采/送样日期分析日期样品数量样品状态监测点位样品编号监测频次标准方法名称标准方法编号测定值：监测结果：备注注：可根据实际工作需要自行设计表格，至少要包括上述信息。12