服务平台 4.1所用试剂应使用分析纯试剂和无菌纯水，特殊情况除外。 4.2浓盐酸溶液：0（HC1）=37%。 4.3浓硫酸溶液：c（H2SO4）=18.4mol/L。 4.4乙醇溶液：0（C2HsOH）=75% 4.5消毒剂：有效氯浓度为1000mg/L 4.6次氯酸钠溶液I：有效氯质量分数为5%。 4.7次氯酸钠溶液II：有效氯质量分数为0.1%。取20mL次氯酸钠溶液I（4.6），与980mL无菌 纯水混合。

6样品采集、保存、运输和交接

住宅标准规范范本6.2样品保存、运输和交接

7.1.1医疗污水病毒检测样品包括吸附于污水中悬浮颗粒物 内 检测样品。 7.1.2样品制备应尽量于采样现场完成。若现场不满足制备要求，应按照6.2的规定转移至实验室进 行处理。 .1.3根据病毒检测的具体要求，样品制备可选择但不限于下列过程，包括样品的pH调节、预过滤 和病毒富集等步骤。

分样和装样的器具均应灭菌处理。 管、冻存管等耗材均应采用市售经环氧乙烷灭菌

7.2.3过滤装置中耐高温器材宜使用压力蒸汽灭菌；不耐高温器材宜使用次氯酸钠溶液II（4.7）浸泡 30min，并使用无菌水冲洗3次，

根据水样pH值，便用盐酸溶液（4.9）或氢氧化钠溶液 （4.13）将水样pH调节至7.0~7.5。

根据水样pH值，使用盐酸溶液（4.9）或氢氧化钠溶液I（4.13）将水样pH调节至7.0~7.5。 4预过滤与悬浮颗粒物病毒检测样品制备

7.4预过滤与悬浮颗粒物病毒检测样品制备

7.4.1组装玻璃纤维滤膜过滤装置。

7.4.2取7.3得到的2L水样进行预过滤，以去除水样中悬浮颗粒物，过滤后滤液转移至2L玻璃烧杯

7.5游离态病毒检测样品制备

将采样时间、地点、工艺类型、采样位点、浓缩前体积、浓缩液体积、空白加标回收率、基体 收率、保存方式等参数记录于医疗污水中病毒样品采集和制备记录表中，记录表样式参照表A.

8.1实验过程应按照附录B规定的方法，选择噬菌体MS2作为标准物质，使用双层平板法测定样品 制备前后噬菌体MS2的效价，并计算样品制备过程中噬菌体MS2的回收率。 3.2实验过程应严格设置空白样品、空白加标样品和基体加标样品。 3.3每批样品应设置一个空白样品实验。空白样品实验中病毒不得检出。 3.4每批样品应设置一个空白加标样品实验。空白加标样品实验回收率应不低于50% 3.5每批样品中设置基体加标样品数量不低于总样品的10%，若样品数量不足10个，应至少设置 个基体加标样品实验。基体加标样品实验回收率应不低于10%。

8.1实验过程应按照附录B规定的方法，选择噬菌体MS2作为标准物质，使用双层平板法测定样品 制备前后噬菌体MS2的效价，并计算样品制备过程中噬菌体MS2的回收率。 3.2实验过程应严格设置空白样品、空白加标样品和基体加标样品。 3.3每批样品应设置一个空白样品实验。空白样品实验中病毒不得检出。 3.4每批样品应设置一个空白加标样品实验。空白加标样品实验回收率应不低于50%。 3.5每批样品中设置基体加标样品数量不低于总样品的10%，若样品数量不足10个，应至少设置 个基体加标样品实验。基体加标样品实验回收率应不低于10%。

10. 1. 1 采样过程

采样人员在样品采集全过程，应佩戴医用外科口罩、一次性橡胶手套、一次性工作帽和一次性鞋套 期间采样应佩戴符合N95/KN95及以上标准的医用防护口罩，还应加穿双层一次性乳胶手套、 户服、全面型呼吸防护器或正压式头套（若条件有限，可佩戴封闭式护目镜等）；口罩脏污、变形 有异味或连续佩戴4小时应及时更换

10.2.1运送人员在运送过程中应穿戴防护手套、医用防护口罩、工作服、靴等防护用品。 10.2.2感染性样品在运送过程中发生意外情况导致样品溢出、散落等情况时，应立即向本单位应急事 故小组取得联系，并在受污染地设立隔离标识，其它车辆和行人不得穿过。

10.3.1实验室应符合二级生物安全防护要求。

附录A （资料性附录） 医疗污水病毒检测样品采集和制备记录表 A.1表A.1给出了医疗污水病毒检测样品采集和制备记录表格式。

A.1表A.1给出了医疗污水病毒检测样品采集和制备记录表格式。

附录A （资料性附录） 医疗污水病毒检测样品采集和制备记录表

表A.1医疗污水病毒检测样品采集和制备记录表

B.2.1生化培养箱：培养温度可在0℃~60℃范围内调节。 B.2.2恒温水浴锅：温度可在室温至99℃范围内调节。 B.2.3电子万用炉：功率为1000W。 B.2.4生物安全柜：安全等级II。 B.2.5压力蒸汽灭菌器：灭菌温度可升至121℃，压力可维持0.1MPa~0.15MPa。

B.3质量控制样品的设置

B.3.1实验中应设置空白样品、空白加标样品和基体加标样品。 B.3.2每批样品应设置一个空白样品实验。采用2L无菌磷酸盐缓冲溶液作为空白样品。 B.3.3每批样品应设置一个空白加标样品实验。采用2L无菌磷酸盐缓冲溶液添加1mL噬菌体MS2工作 液（B.1.4）作为空白加标样品。 B.3.4每批样品中设置基体加标样品数量不低于总样品的10%，若样品数量不足10个，应至少设置 个基体加标样品实验。采用2L医疗污水样品添加1mL噬菌体MS2工作液（B.1.4）作为基体加标样品。

B.4噬菌体MS2效价的测定

B.4.1采用双层平板法测定噬菌体MS2效价

B.4.2.1使用电炉加热半固体培养基A组分至融化，降温至45℃~50℃，与培养基B组分按照950：50 的比例混合得到半固体培养基。将混合后的半固体培养基按需分装至无菌离心管中，每管中加入35mL 半固体培养基。分装后半固体培养基放入45℃水浴锅中保持温度，防止凝固。 B.4.2.2取固体培养基平板，将样品名称、实验时间和实验人标记于平板背面，倒置于37℃生化培养 箱预热30min B.4.3待测样品量的选择。待测样品应进行梯度稀释，按照1:10，1:100和1:1000进行稀释，用于后续 测试。 B.4.4向分装有半固体培养基的离心管中加入梯度稀释后待测样品量5mL，宿主细菌E.coli2.5mL 离心管上下颠倒混匀，避免产生气泡。 B.4.5将混有样品和宿主细菌E.col的半固体培养基分别加入到5个已预热的固体平板中，每个平板中 加人8.5mL。待半固体凝固后，倒置放人生化培养箱，37℃培养16h~24h， B.4.6在培养基平板上选择清晰的噬菌斑进行计数。应选择噬菌斑个数介于30~300的平板进行计数， 若噬菌斑个数超过300，则应对样品进行进一步稀释重新开展实验。每个样品对应5个平板的噬菌斑个数 分别记为Plt1,Plt2,Plt3,Plt4和Plt5。

B.5.1噬菌体MS2效价的计算

每个样品对应5个平板的噬菌斑个数分别记为Plt1，Plt2，Plt3，Plt4和Plt5，则该样 MS2的效价可按公式（B.1）计算：

Plt1 + Plt2 + Plt3 + Plt4 + Plt5

式中： 噬菌体效价，PFU/mL； 1 V ——样品体积路基标准规范范本，mL； Plt 平板噬菌斑计数，PFU。

式中： 1 噬菌体效价，PFU/mL； V 样品体积，mL； Plt 平板噬菌斑计数，PFU

式中： 1 噬菌体效价，PFU/mL； V 样品体积，mL； Plt 平板噬菌斑计数，PFU

医疗污水中病毒检测样品制备过程的回收率可按公式（B.2）计算

中： R 回收率，%； I1 样品制备前噬菌体MS2的效价，PFU/mL； 12 样品制备后噬菌体MS2的效价，PFU/mL； V1 样品制备前的体积，mL； V 样品制备后的体积混凝土标准规范范本，mL。

2 × V2 × 100% I1 × Vi