将石油烃降解菌配成液体，用手持或背式喷雾器直接喷洒至石油污染区域。在低潮期进行石油烃 降解菌的施加，石油烃降解菌的初始浓度宜为105CFU/L；在石油烃降解菌施加频率上，微生物修复前 期，施加频率为1d～3d一次，1周后施加频率降低为5d～7d一次，每周在菌剂喷洒前进行右油烃降 解菌分析，若污染区域石油烃降解菌的丰度显著提高，则施加频率降低为一个月一次，直至微生物修复 终止。

石油污染微生物修复的监测项目和分析方法见表2。微生物修复开始后，应分时段采集岸滩沂 详品，根据当地潮汐在低潮时段进行采样

表2微生物修复的监测项目和分析方法

石油降解率； C。 修复前石油污染物浓度，单位为毫克/升（mg/L）； C. 修复第n天石油污染物浓度，单位为毫克/升（mg/L）

D.石油降解率； 修复前石油污染物浓度，单位为毫克/升（mg/L）； C. 修复第n天石油污染物浓度，单位为毫克/升（mg/L）。

一种情况时，微生物修复可终止： a）当沉积物中石油污染物浓度检测值接近污染前的背景值时； b）当微生物修复方法的使用不能继续提高石油降解率或降解率达到70%以上时。

当检测分析的结果同时或者出现以下任何一种情况时，微生物修复可终止： a）当沉积物中石油污染物浓度检测值接近污染前的背景值时； b）当微生物修复方法的使用不能继续提高石油降解率或降解率达到70%以上时。

附录A （规范性附录） 石油烃降解菌数量检测——油平板法

柴油无机盐固体培养基成分及其配置方法如下： 成分:NaCl22.0g;MgSO4·7H,O2.0g;NH,NO1.0g;KCl0.5g;KHzPO41.0g;Na2HPO4 3.0gCaClz0.1g;FeCla0.005g;MnSO40.002g;ZnCl20.002g;琼脂15g；重柴油10mL蒸 馏水1000mL。 制法：将上述成分（重柴油除外）混匀，调整pH值至7.5，121℃高压湿热灭菌15min；将 100mL重柴油单独装于250mL三角瓶，121℃高压湿热灭菌15min。然后取10mL灭菌重 柴油至上述灭菌培养基中混匀，将此培养基倒人经灭菌的各平皿中，每平皿约20mL，待其冷 却凝固，置4℃冰箱内保存备用

柴油无机盐固体培养基成分及其配置方法如下： 成分:NaCl22.0g;MgSO4·7H,O2.0g;NH,NO1.0g;KCl0.5g;KHzPO41.0g;Na2HPO 3.0gCaClz0.1g;FeCla0.005g;MnSO40.002g;ZnCl20.002g;琼脂15g；重柴油10mL蒸 馏水1000mL。 制法：将上述成分（重柴油除外）混匀，调整pH值至7.5，121℃高压湿热灭菌15min；将 100mL重柴油单独装于250mL三角瓶，121℃高压湿热灭菌15min。然后取10mL灭菌重 柴油至上述灭菌培养基中混匀，将此培养基倒人经灭菌的各平皿中，每平皿约20mL，待其冷 却凝固，置4℃冰箱内保存备用

石油烃降解菌数量检测步骤如下： a）将无菌称取的1g沉积物样品加人装有99mL无菌陈海水的三角瓶中，室温200r/min供暖标准，振荡 30min; b 将振荡均匀的样品进行10倍稀释，根据采样季节与溢油区距离等环境因素选取适当稀释度的 样品进行分离培养； 选取适当稀释梯度样品0.1mL到灭菌柴油无机盐平板上，无菌涂布均匀，每个稀释度重复 3次； d） 待样品均匀渗透到培养基后，将接种后的灭菌柴油无机盐平板置28℃恒温培养箱中培养 7d~14d; e 选择菌落数在30个～300个之间的平皿，以平均菌落数乘其稀释倍数，即为样品中的石油烃 降解菌数。

石油烃降解菌数量检测步骤如下： a）将无菌称取的1g沉积物样品加人装有99mL无菌陈海水的三角瓶中，室温200r/min，振荡 30min; b 将振荡均匀的样品进行10倍稀释，根据采样季节与溢油区距离等环境因素选取适当稀释度的 样品进行分离培养； 选取适当稀释梯度样品0.1mL到灭菌柴油无机盐平板上，无菌涂布均匀，每个稀释度重复 3次； d） 待样品均匀渗透到培养基后，将接种后的灭菌柴油无机盐平板置28℃恒温培养箱中培养 7d~14d; e 选择菌落数在30个～300个之间的平皿，以平均菌落数乘其稀释倍数，即为样品中的石油烃 降解菌数。

HY/T02862020