6.2.1微生物污染指标检验

总数、霉菌和酵母菌、致病菌及无菌检验按附录A

6.2.2杀灭微生物试验

水质标准毒技术规范》（2002年版）、相应的标准方法进行测

GB 27951—2021

GB 279512021

6.3.1 毒理学试验

6.3.2铅、汞、砷的测定

6.3.3抗生素、抗真菌、抗病毒药物等测定

按WS/T684、WS/T685、WS/T686等方法进行测定。

使用中皮肤消毒剂菌落总数≤50CFU/mL（g），霉菌和酵母菌≤10CFU/mL（g），不得检出溶血 菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌；使用中破损皮肤消毒剂应符合出厂要求；怀疑感染与皮肤消 关时，应进行目标微生物检验，有污染时不得使用。适用于皮肤擦拭、冲洗、喷酒，常用皮肤消毒 使用剂量与方法见附录B。

8.1标签说明书应符合GB38598的要求。 8.2皮肤消毒剂应用液葡萄糖酸氯已定或醋酸氯已定含量≤45g/L，三氯羟基 20g/L，苯扎漠铵或苯扎氯铵消毒剂有效含量≤5g/L。 8.3避免与抗药物同用。 8.4过敏者慎用。 8.5有效期内使用。 8.6使用碘消毒后，应脱碘。 8.7外用消毒剂，不得口服，置于儿童不易触及处。 8.8 避光、密封、防潮，置于阴凉、干燥处保存。 8.9 储存应符合GB/T26371、GB/T26373要求，易燃易爆者，远离火源

8.1标签说明书应符合GB38598的要求。 3.2皮肤消毒剂应用液葡萄糖酸氯已定或醋酸氯已定含量≤45g/L，三氯羟基二苯醚消毒剂有效含量 20g/L，苯扎漠铵或苯扎氯铵消毒剂有效含量≤5g/L。 8.3避免与抗药物同用。 8.4过敏者慎用。 8.5有效期内使用。 8.6使用碘消毒后，应脱碘。 8.7外用消毒剂，不得口服，置于儿童不易触及处。 3.8 避光、密封、防潮，置于阴凉、干燥处保存。 8.9储存应符合GB/T26371、GB/T26373要求，易燃易爆者，远离火源

A.1菌落总数检测方法

附录A （规范性） 微生物污染指标检验方法

A.1.1.1压力蒸汽灭菌器、洁净工作台、36℃士1℃恒温培养箱， A.1.1.2三角瓶、量筒、试管、无菌平皿、无菌刻度吸管。 A.1.1.3天平、酒精灯、放大镜、振荡器， A.1.1.4胰蛋白冻大豆肉汤培养基（TPS）、普通营养琼脂培养基、经中和剂鉴定试验合格的

A.1.2.1样品处理：取消毒剂5.0mL(g），加人到45.0mL经中和剂鉴定试验合格的中和剂的无菌TPS 中，震荡20s或振打80次，制成1：10稀释液。 A.1.2.2操作步骤：用无菌吸管吸取1：10稀释液2mL，分别注人两个无菌平皿内，每皿1mL。另取 1mL注人9mL无菌TPS试管中，并震荡20s或振打80次，充分混勾，制成1：100稀释液。吸取 2mL，分别注入两个无菌平皿内，每皿1mL。如样品含菌量高，还可再继续稀释，每种稀释度应换1支 吸管。将融化并冷至45℃～50℃的普通营养琼脂培养基倾注到平皿内，每皿约15mL，随即转动平 板，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃土1℃培养箱内培养48h士2h。 另取一个不加样品的无菌平皿，加入药15mL普通营养琼脂培养基，待琼脂凝固后，翻转平板，置 36℃±1℃培养箱内培养48h±2h，为空白对照。 A.1.2.3结果报告：先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5倍10倍的放大镜检查，以防遗漏。 记下各平板的菌落数后，求出同一稀释度各平板生长的平均菌落数。判定结果时，应选取菌落数在 30个～300个范围之内的平板计数，乘以稀释度报告1mL（g）消毒剂中所含菌落的总数（CFU），以 CFU/mL（g）表示。若所有的稀释度均无菌生长，报告数为<10CFU/mL（g）

A.2霉菌和酵母菌检测方法

A.2.1.1压力蒸汽灭菌器、洁净工作台、28℃士1℃恒温培养箱， A.2.1.2三角瓶、量筒、试管、无菌平皿、无菌刻度吸管。 A.2.1.3天平、酒精灯、放大镜、振荡器， A.2.1.4胰蛋白冻大豆肉汤培养基（TPS)、沙堡罗琼脂培养基、经中和剂鉴定试验合格的中和剂。

A.2.2.1样品处理：见A.1.2.1。 4.2.2.2操作步骤：取1：10、1：100、1：1000的稀释液各1mL分别注人无菌平皿内，每个稀释度接 钟2个平皿，注入融化并冷至45℃～50℃的沙堡罗琼脂培养基，充分摇匀。凝固后，翻转平板，置 28℃士1℃培养72h士2h，计数平板内生长的霉菌和酵母菌数。若有霉菌蔓延生长，为避免影响其他 霉菌和酵母菌的计数时，于48h土2h应及时将此平板取出计数。另取一个不加样品的无菌平皿，加入 约15mL沙堡罗琼，

GB 279512021

A.2.2.3脂培养基，待琼脂避固后，翻转平板，置28C土1℃培养72h土2h，为空白对照。 1.2.2.4结果报告：先点数每个平板上生长的霉菌和酵母菌菌落数，求出每个稀释度的平均菌落数。 判定结果时，应选取菌落数在10CFU～150CFU的平板计数，乘以稀释倍数即为每毫升（或每克）消毒 剂中所含的霉菌和酵母菌数。以CFU/mL（g）表示。若所有的稀释度均无菌生长，报告数为 <10CFU/mL(g)

A.3.1金黄色葡萄球菌检测方法

A.3.1.1试验器材

A.3.1.1.1压力蒸汽灭菌器、生物安全柜、36℃土1℃恒温培养箱。 A.3.1.1.2三角瓶、量筒、无菌试管、无菌平皿、无菌刻度吸管。 A.3.1.1.3载玻片、酒精灯、显微镜、振荡器离心机。 A.3.1.1.4血琼脂培养基、7.5%的氯化钠肉汤、甘露醇发酵培养基、兔（人)血浆。

A.3.1.1.1压力蒸汽灭菌器、生物安全柜、36℃土1℃恒温培养箱。 1.3.1.1.2 三角瓶、量筒、无菌试管、无菌平皿、无菌刻度吸管。 A.3.1.1.3载玻片、酒精灯、显微镜、振荡器离心机。 A.3.1.1.4血琼脂培养基、7.5%的氯化钠肉汤、甘露醇发酵培养基、兔（人)血浆。

A.3.1.2试验步骤

A.3.1.2.1样品处理：见A.1.2.1。 1.3.1.2.2增菌培养：取样品1：10稀释液10mL接种到2倍浓缩的10mL7.5%的氯化钠肉汤中，置 36℃±1℃增菌培养24h±2h。 A.3.1.2.3分离培养：自上述增菌培养液中，取12接种环，划线接种在血琼脂培养基，置36℃士1℃ 培养24h～48h。本菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶 血圈。 1.3.1.2.4染色镜检：挑取分纯菌落，涂片，进行革兰染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排 列成葡萄状，无芽孢，无夹膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为0.5um～1μm。 A.3.1.2.5甘露醇发酵试验：取上述可疑菌落接种于甘露醇培养基，于36℃土1℃培养24h，发酵甘露 醇产酸者为阳性。 1.3.1.2.6血浆凝固酶试验：吸取1：4新鲜兔（人）血浆0.5mL，放人无菌小试管中，加人待检菌24H 土2h肉汤培养物0.5mL。混匀，放36℃士1℃恒温箱或恒温水浴中，每30min观察一次，6h之内如 呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5mL，分别 加人无菌1：4血浆0.5mL，混匀，作为对照

A.3.1.2.1样品处理见A.1.2.1。 1.3.1.2.2增菌培养：取样品1：10稀释液10mL接种到2倍浓缩的10mL7.5%的氯化钠肉汤中，置 36℃±1℃增菌培养24h±2h。 A.3.1.2.3分离培养：自上述增菌培养液中，取1～2接种环，划线接种在血琼脂培养基，置36℃士1℃ 培养24h～48h。本菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶 血圈。 A.3.1.2.4染色镜检：挑取分纯菌落，涂片，进行革兰染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排 列成葡萄状，无芽孢，无夹膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为0.5um～1μm。 A.3.1.2.5甘露醇发酵试验：取上述可疑菌落接种于甘露醇培养基，于36℃土1℃培养24h，发酵甘露 醇产酸者为阳性。 1.3.1.2.6血浆凝固酶试验：吸取1：4新鲜兔（人）血浆0.5mL，放人无菌小试管中，加人待检菌24h 土2h肉汤培养物0.5mL。混匀，放36℃士1℃恒温箱或恒温水浴中，每30min观察一次，6h之内如 呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5mL，分别 加人无菌1：4血浆0.5mL，混勾，作为对照

A.3.1.3结果报告

凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇 血浆凝固酶试验阳性者，可报告检出金黄色葡萄球菌

A.3.2铜绿假单胞菌检测方法

A.3.2.1试验器材

A.3.2.1.1压力蒸汽灭菌器、恒温培养箱（42℃士1℃、36℃土1℃）。 A.3.2.1.2三角瓶、量筒、试管、无菌平皿、无菌刻度吸管。 A.3.2.1.3载玻片、酒精灯、显微镜、振荡器离心机、电磁炉。 A.3.2.1.4普通肉汤、十六烷基三甲基溴化铵培养基、绿脓菌素测定用培养基、明胶培养基、硝 陈水培养基、普通琼脂斜面培养基、1%二甲基对苯二胺溶液

A.3.2.1.1压力蒸汽灭菌器、恒温培养箱（42℃土1℃、36℃土1℃）。 A.3.2.1.2三角瓶、量筒、试管、无菌平皿、无菌刻度吸管。 1.3.2.1.3载玻片、酒精灯、显微镜、振荡器离心机、电磁炉。 A.3.2.1.4普通肉汤、十六烷基三甲基溴化铵培养基、绿脓菌素测定用培养基、明胶培养基、硝酸盐蛋白 陈水培养基、普通琼脂斜面培养基、1%二甲基对苯二胺溶液

A.3.2.2试验步骤

A.3.2.3结果报告

被检消毒剂经增菌分离培养后，证实为革兰阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验均为阳性者，即可报 吉被检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验 三者为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌

A.3.3.1试验器材

A.3.3.1.1压力蒸汽灭菌器、36℃土1℃恒温培养箱。 A.3.3.1.2 三角瓶、量筒、试管、无菌平皿、无菌刻度吸管。 A.3.3.1.3 载玻片、酒精灯、接种针、接种环、显微镜、振荡器离心机、电磁炉。 A.3.3.1.4 1%葡萄糖肉汤、血琼脂培养基、TPS、30%H2O2、草酸钾、兔（人）血浆、0.25%氯化钙、杆菌 肽纸片

3.3.1.1压力蒸汽灭菌器、36℃士1℃恒温培养箱。 3.3.1.2三角瓶、量筒、试管、无菌平皿、无菌刻度吸管。 3.3.1.3 载玻片、酒精灯、接种针、接种环、显微镜、振荡器离心机、电磁炉。 3.3.1.4 1%葡萄糖肉汤、血琼脂培养基、TPS、30%H2O2、草酸钾、兔（人）血浆、0.25%氯化钙、木 纸片

A.3.3.2试验步骤

A.3.3.2.1样品处理：见A.1.2.1

A.3.3.2.2增菌培养：取样品1：10稀释夜10mL接种到2倍浓缩的10mL1%葡萄糖肉汤，置36℃ ±1℃培养18h~24 h。 1.3.3.2.3分离培养：从培养液的薄膜处挑取培养物，划线接种在血平板上，置36℃士1℃培养18h~ 24h。乙型溶血性链球菌在血平板上菌落形态为灰白色、半透明或不透明、针尖状突起、表面光滑、边 缘整齐、周围有β溶血圈 A.3.3.2.4染色镜检：挑取可疑的菌落，涂片，革兰染色，镜下为革兰阳性、呈链状排列的球菌。 A1.3.3.2.5触酶试验：用接种环挑取培养18h～24h单个菌落放在洁净玻片上，用滴管在玻片的细菌上 商加30%HO（操作顺序不能颠倒，否则易出现假阳性）立刻观察有无冒泡，并记录结果，有气泡者为 阳性，乙型溶血性链球菌呈阴性。 1.3.3.2.6链激酶试验：吸取草酸钾血浆0.2mL（0.02g草酸钾加5mL人血浆混匀，经离心沉淀，吸取 上清），加人0.8mL无菌TPS混匀后再加人待检菌24h肉汤培养物0.5mL和0.25%氯化钙0.25mL， 昆匀，放入36℃士1℃水浴中，每2min观察一次（一般10min内可凝固），待血浆凝固后继续观察并记 录溶化的时间，如2h内不溶化，移入培养箱观察24h的结果，如全部溶化为阳性；24h仍不溶解者为 性。 A.3.3.2.7杆菌肽敏感试验：将被检菌浓菌液涂于血平板上，用无菌镊子取含0.04单位杆菌肽纸片放 在平板表面上。同时以已知阳性菌株作对照，于36℃士1℃培养18h～24h，有抑菌带者为阳性

A.3.3.3结果报告

被检消毒剂经增菌分离培养后，经证实为革兰阳性、呈链状排列的球菌，触酶阴性、链激 性、对杆菌肽敏感者，即可报告为检出乙型溶血性链球菌

先菌生理盐水稀释至1：10° 4.4.2.7无菌室与试验台消毒：对无菌室地面与桌面以及试验台台面擦净消毒后，将无菌试验用的培 养基、洗脱液、供试品及其他需用器材放妥。开启紫外线灯消毒1h。

B.1完整皮肤常用消毒剂的种类

仿古建筑B.2破损皮肤常用消毒剂的种类

季铵盐类、胍类消毒剂以及过氧化氢、碘伏、三氯羟基二苯醚、酸性电解水等。 B.3 常用皮肤消毒剂推荐使用剂量、作用方式及作用时间 见表B.1。

附录B （资料性） 常用皮肤消毒剂推荐使用剂量与方法

常用皮肤消毒剂推荐使用剂量与方法

机电标准规范范本B.4其他皮肤消毒剂剂量

按WS628消毒产品卫生安全评价技术要求，评价的其他合格皮肤消毒剂，可遵循产品使

5628消毒产品卫生安全评价技术要求，评价的 格皮肤消毒剂，可遵循产品使用说明书