HJ 1215-2021  水质 浮游植物的测定 滤膜-显微镜计数法

按照GB/T14581、HJ/T91和HJ494的相关规定米集定量样品。 使用采水器（6.3）采集1L～2L样品至定量采样瓶（6.4）中。若水体透明度较高，浮游植物数 量较少时，应酌情增加采样体积。定量样品采集完成后，定量采样瓶（6.4）不应装满，以便摇匀。 注1：有些浮游植物（如蓝藻）常上浮在水面或成片、条带分布，可在此水华密集区域采样作为峰值参考 注2：定量样品采集应在定性样品采集之前。应保持固定时间段采样，以便结果之间可相互比较

定性样品采集后应立即加入鲁哥氏碘液（5.4）固定，用量为水样体积的1.0%～1.5%。镜检活 不加鲁哥氏碘液（5.4）固定。定性样品在室温避光条件下可保存3周；1℃～5℃冷藏避光条 保存12个月。活体样品4℃～10℃冷藏避光条件下可保存36h。

定量样品采集后立即加入鲁哥氏碘液（5.4）固定，用量为水样体积的1.0%～1.5%。也可将鲁哥 天碘液（5.4）提前加入定量采样瓶（6.4）中带至现场使用。定量样品在室温避光条件下可保存3周； 1℃～5℃冷藏避光条件下可保存12个月。 样品在保存过程中，应每周检查鲁哥氏碘液（5.4）的氧化程度，若样品颜色变浅，应向样品中补 加适量的鲁哥氏碘液（5.4），直到样品的颜色恢复为黄褐色， 注：若样品需长期保存，应加入甲醛溶液（5.3），用量为水样体积的4%

按照8.1.2～8.1.5的要求完成预检装片，判断样品浮游植物密度，便于样品的后续分析。

剪力墙标准规范范本8. 1. 2 混匀样品

根据预检估算浮游植物密度，调整样品过滤体积，最终使滤膜上约有40个～105个浮游植物细 不同预检估计密度水平下推荐的样品过滤体积见表1。

表1推荐选用的样品过滤体积

用量筒或移液器（6.16）快速量取适量样品体积，将样品加入装有滤膜（5.6）的真空抽滤装置（6.6） 漏斗中，静置2min～3min，真空抽滤，至漏斗中有0.5cm液层时关闭真空泵，使剩余液体完全通过漏 斗，切忌抽干滤膜。

8. 1. 5 装片制备

样品过滤完成后，用无齿组织镊子（6.9）取下滤膜，保持截留浮游植物的一面向上，放在滴有1 改镜浸没油（5.5）的载玻片（6.7）上，再用透明玻璃滴棒在滤膜上滴2滴显微镜浸没油（5.5），半 （6.7）放入载玻片晾片板（6.10），置于烘箱（6.11）中，70℃土2℃加热2h。2h后取出载理 板（6.10），观察滤膜是否透明。若已透明，再在滤膜上滴加2滴显微镜浸没油（5.5），盖上盖现

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），装片制备完成。若滤膜加热2h后未透明，延长加热时间，不超过24h。盖上盖玻片（6.8）日 尤动滤膜。

在显微镜（6.12）下观察定性样品，鉴定浮游植物的种类。优势种类鉴定到种，其他种类至少应鉴 定到属。部分鉴定参考资料见参考文献。 注：种类鉴定除用定性样品观察外，还可吸取已完成计数的定量样品进行观察

计数前标定显微镜（6.12），确定计数视野面积（Whipple视野或目镜视场视野）。显微镜标定 舌载物台测微计（6.13）和惠普尔目镜分划板（6.14）。惠普尔目镜分划板标定方法参见附录B。

8. 3.2显微镜计数

不同密度水平样品推荐视野类别及计数视野数量见表2。将装片（8.1.5）置于显微镜（6.12）载物 台上，用Whipple视野或目镜视场视野进行镜检计数。较低密度水平样品计数，建议选择目镜视场视野 十数。根据浮游植物细胞大小，选择目镜10×、物镜20×或目镜10×、物镜40×放大倍数镜检，记录 每个视野的浮游植物种类及数量

不同密度水平样品推荐视野类别及计数视野数

Whipple视野计数规则：视野中处于 线的藻类计入总数，处于上边界及左边界线的 藻类不计入总数，如图1。若出现丝状体等较大个体显著穿过两个或多个格子的边界时，应在低倍镜下 单独计数，再计入总数。破损细胞不计数。丝状体或似球形群体细胞数估算参见附录C。计数时宜缓慢 多动显微镜载物台，应避免在一个区域重复抽样，确保滤膜上、下、左、右和申部区域的视野均有抽样。 显微镜视野在滤膜上的移动方向如图2所示，

图1Whipple视野计数约定规则示意图

样品中浮游植物的细胞密度按照公式（1）计算。

式中：N—样品中浮游植物的细胞密度，cells/L Af—滤膜有效过滤面积，mm； A—计数面积（镜检计数的视野面积之和），mm； 显微镜观察计数的浮游植物细胞数，cells； Vo—过滤样品的取样体积，ml; 1000一一体积单位换算系数，ml/L

测定结果以科学计数法表示，保留2位有效数字。

图2显微镜视野在滤膜上的移动示意图

×1000 4 Vo

6家实验室分别对含高密度水平（1.0×10°cells/L）、中密度水平（4.0×10°cells/L）和低密度水 平（7.0×104cells/L）的浮游植物样品进行了6次重复测定：实验室内相对标准偏差分别为0.18%～ 0.64%，0.22%～0.49%，0.37%1.16%；实验室间相对标准偏差分别为：0.28%、0.68%、1.57%。计 算精密度所用数据均经以10为底进行对数转换。高、中、低密度验证样品的实验室间95%置信区间 见表3。

中、低密度水平验证样品的实验室间95%置信区

11质量保证和质量控制

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11.1最小计数量：优势种种类计数最少100个～150个。 11.2每批次样品中，随机抽取10%的样品做平行测定，用计数差异百分比（percentdifferencein enumeration，PDE）评估数据的精密度。按照公式（2）计算PDE

式中：PDE一一计数差异百分比，%； Ni—平行样1测定结果的均值，cells/L； Nz—平行样2测定结果的均值，cells/L。 11.3定期标定显微镜，标定目镜分划板及视野面积，每年至少1次。

中：PDE二计数差异百分比，%： Ni—平行样1测定结果的均值，cells/L； N2—平行样2测定结果的均值，cells/L。 3定期标定显微镜，标定目镜分划板及视野面积，每年至少1次

实验中产生的废液应分类收集，集中保管，依法委托有资质的单位进行处理。

附录A （规范性附录） 方法检出限计算方法

方法检出限计算方法 附录A给出了方法检出限的计算方法。方法检出限与计数视野数、可计数视野总数及子样本体积 有关。假设样品在滤膜上符合随机分布，

MDL= Ne ×ln0.01 nexVo

B. 1. 1 载物台测微计

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载物台测微计（6.13）如图B.1所示，是一块特制的载玻片，其中央有一个小圆圈。圈内刻有分度， 将长度为1mm的直线等分为100个小格，每个小格长度等于10um。

B.1.2惠普尔目镜分划板

图B.1载物台测微计示意图

惠普尔目镜分划板（6.14）如图B.2所示，是一种网格型目镜分划板，外观为刻有方格的玻璃圆盘， 包含1个大格，大格被等分成100个中格，中心位置的1个中格又被等分为25个小格。标定惠普尔目 镜分划板，以计算不同放大倍数下的Whipple视野面积。使用载物台测微计（6.13）标定惠普尔目镜分 划板。载物台测微计规格为1mm，均分成100等分，每小格代表10um。

图B.2惠普尔目镜分划板示意图

B.2惠普尔目镜分划板标定步骤

B.2.1将惠普尔目镜分划板（6.14）刻度向下装入目镜隔板上。 B.2.2将载物台测微计（6.13）放在显微镜载物台上，刻度朝上。先用低倍镜对焦，使视野中载物台 测微计标尺刻度清晰。 B.2.3转动目镜，使惠普尔目镜分划板标尺与载物台测微计标尺刻度平行，移动载物台使载物台测微 计标尺与惠普尔目镜分划板标尺重叠，再使两尺的“0”刻度完全重合。定位后，查找确定两尺第2个 完全重合的刻度，计数两组重合刻度之间惠普尔目镜分划板的格数Nw和载物台测微计标尺的格数Ns， 如图B.3所示。载物台测微计每格长度10um，在一定放大倍数下，惠普尔目镜分划板的标定结果即是 每格的长度。

式中：L—惠普尔目镜分划板的中格边长，μum； Ls—载物台测微计标尺上单格的长度，um; Ns一两组重合刻度线之间载物台测微计标尺的格数； Nw—两组重合刻度线之间惠普尔目镜分划板上中格的格数 将计算数据填入表B.1。依据表B.1完成表B.2。

图B.3载物台测微计标定惠普尔目镜分划板

图B.3载物台测微计标定惠普尔目镜分划板示意图

Le=Ls × A Ns

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电气标准规范范本表B.1惠普尔目镜分划板标定结果

表B.2惠普尔目镜分划板面积计算结果

式中：NT—丝状体总细胞数，cells; Nt——丝状体平均细胞数，cells/个； 一丝状体数目，个。 若呈偏态分布，按照公式（C2）计算丝状体总细胞数量

式中：NT 一丝状体总细胞数，cells; M——丝状体平均细胞数中位值，cells/个； 丝状体数目，个。

C.2似球形群体细胞数估算

附录C （资料性附录） 丝状体、似球形群体浮游植物细胞数量估算

log1o N.=2.99 logio de 2

式中：N似球形群体细胞数，cells; 2.99一一线性回归方程的斜率； de平均群体直径，um; 2.80一一线性回归方程的截距。 使用该公式估算微囊藻群体细胞数时，测量似球形群体体积应忽略群体的表层胶被，群体直径为充 满细胞部分的直径；将非球形群体视为圆柱体、卵圆体估算群体体积；应随机测量至少30个群体，以 获得合理的群体平均体积，平均群体直径为等同于群体平均体积的似球形群体的直径。 特别大的群体，可通过目镜分划板对大群体的一小部分面积进行细胞计数，然后估算整个群体面积 总细胞数混凝土标准规范范本，并在工作记录表上加以说明

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