HG／T 5926-2021  水处理用生物药剂 反硝化菌剂

5.3.3.2恒温培养箱

5.3.3.3旋转式摇床，

5. 3. 4 试验步骤

5.3. 4. 1 无菌水的制备

饲养标准HG/T59262021

将水装入三角瓶中，用组培封口膜封口，于121℃土1℃下高压蒸汽灭菌30min，冷却，备

5.3.4.2培养基的制备

5.3.4.2.1培养基I

培养基中各物质浓度：胰蛋白陈10.0g/L；酵母提取物5.0g/L；氯化钠10.0g/L；琼脂15g g/L。 用碳酸钠溶液或盐酸溶液调节pH值为6.5～7.0，于121℃±1℃下高压蒸汽灭菌30min。

5.3.4.2.2培养基Ⅱ

培养基中各物质浓度：蛋白陈20g/L；牛肉膏3g/L，氯化钠5g/L；硝酸钾1g/L。 用碳酸钠溶液或盐酸溶液调节pH值为7.4士0.2，分装于试管中，于121℃士1℃下高压蒸汽灭 菌30min。

5.3.4.3样品稀释

5. 3. 4.4涂布及培养

将20mL30mL灭菌后冷却至50℃左右的培养基I倾注于平皿中。待培养基凝固后，每个样 品选取3个适宜的稀释度，每个稀释度移取0.10mL加至预先制备好的固体平板培养基上，用涂布 捧涂布均匀，每个稀释度平行涂布3个。同时以无菌水作为空白对照。 将平板倒置于35℃±1℃的恒温培养箱中，培养12h~24h。

5.3. 4.5菌落计数

以出现30个300个菌落数的稀释度的平板为计数标准。 若只有1个稀释度，其平均菌落数在30个～300个之间时，以该平均菌落数计算。 若有2个稀释度，其平均菌落数均在30个～300个之间时，应按两者菌落总数的比值决定。若 比值小于等于2，应计算两者的平均数：若比值大于2，则以稀释度小的菌落平均数计算。

5.3.4.6确证试验

反硝化菌应具有硝酸盐还原活性，从有效计数 将待测菌落接种到培养基Ⅱ上，于36℃士1℃下培养2d4d。加入甲液和乙液各1滴，观 ，如溶液变为红色、橙色，即为硝酸盐还原阳性。如无红色出现，取0.1mL至洁净的白色点

HG/T 59262021

5. 3. 5 结果计算

菌量以每毫升或每克样品中的菌落数X计，液体产品数值以菌落形成单位每毫升（CFU 表示，固体产品数值以菌落形成单位每克（CFU/g）表示，按公式（1）计算：

NN2f X= N.V

式中： 菌落平均数； N2 硝酸盐还原确证为阳性的菌落数； 于 稀释度； N1 用于确证试验挑选的菌落数； V 涂布的稀释菌液的体积的数值，单位为毫升（mL）（V=0.1）。

在一定温度下，将样品置于电热干燥箱内烘干至恒量，根据干燥前后的样品质量差值测得水分 含量。

5.4.2.1电热干燥箱：温度可控制在110℃士2℃。

5.4.2.2称量瓶：d60mmX30mm

5. 4.3 试验步骤

使用预先于110℃土2℃下干燥至恒量的称量瓶称取约1g样品（精确至0.2mg），置于干燥箱 中，在110℃±2℃下干燥2h，取出后置于干燥器中冷却至室温，称量，直至恒量。

水分含量以质量分数W，计，数值以%表示，按公式（2）计算

氏 m——试料的质量的数值，单位为克（g)； 一干燥后样品和称量瓶的质量的数值，单位为克（g）； m。———称量瓶的质量的数值，单位为克（g)。 计算结果表示到小数点后2位

5. 5. 1 方法提要

HG/T 59262021

将配有测量电极和参比电极的酸度计 测溶液中，测量试验溶液的pH值。

5. 5. 3 试验步骤

固体样品称取15g（精确至0.01g），置于50mL烧杯中。加入30.0mL无二氧化碳的水落 拌均匀，静置30min。将电极浸入溶液，在已定位的酸度计上读出pH值。 液体产品量取原液直接测定

5. 6 杂菌率的测定

样品中的杂菌以霉菌计，按GB20287一2006中6.3.3～6.3.4的规定进行。

5.7反硝化性能的测定

警告：本试验方法中所使用的部分试剂： 化性和皮肤腐蚀性，操作时应小心谨慎，必要时 宜在通风橱中操作。如接触皮肤或眼睛应立即用水冲洗，严重者应立即就医。

5. 7. 1 方法提要

在30℃土1℃条件下，将反硝化菌剂置于活化培养基中培养一定时间，使其恢复活性。将恢复 活性的反硝化菌剂加至测试培养基中进行培养，测定硝态氮和亚硝态氮的质量浓度的变化，计算硝态 氮和亚硝态氮变化速率，该速率反映反硝化菌剂的脱氮性能，即反硝化性能，

5.7.2.1葡萄糖。 5. 7. 2. 2 硝酸钠。 5.7.2.3亚硝酸钠。 5.7. 2. 4 磷酸氢二钾。 5. 7. 2. 5 硫酸镁（MgSO4·7H2O)。 5. 7. 2. 6 硫酸亚铁（FeSO4·7H2O)。 5. 7. 2.7 盐酸溶液：10%。 5. 7. 2. 8 碳酸钠溶液：100g/L。 5.7.2.9微孔滤膜：孔径为0.45μm。

5.7.3.1恒温磁力搅拌水浴锅

HG/T5926—2021 5.7.3.2溶解氧测定仪。

5.7. 4 试验步骤

5.7.4.1硝态氨还原性能的测定

5.7.4.1.1培养基的制备

培养基中各物质浓度：葡萄糖1.0g/L；硝酸钠：1.2g/L；磷酸氢二钾0.05g/L；七水合 0.1g/L；七水合硫酸亚铁0.2g/L。 于115℃士1℃下高压蒸汽灭菌20min。置于暗处保存，并在1个月内使用，使用前用碳 液或盐酸溶液调节溶液的pH值在6.0～7.5，并用氮气置换至溶解氧浓度小于0.5mg/L

5.7. 4. 1. 2 菌剂活化

固体菌剂活化：准确称取5.0g菌剂，加至盛有500.0mL培养基的1L三角瓶中，将三角瓶放人恒 温磁力搅拌水浴锅中，温度保持在30℃士1℃，开启磁力搅拌，控制溶解氧浓度小于0.5mg/L，活化 4h~12h。 液体菌剂活化：准确量取250.0mL菌剂，加至盛有250.0mL培养基的1L三角瓶中，将三角 瓶放入恒温磁力搅拌水浴锅中，温度保持在30℃土1℃，开启磁力搅拌，控制溶解氧浓度小于 0.5mg/L，活化4h~12h

5.7.4.1.3测定

5. 7. 4. 1. 4 结果计算

5. 7. 4. 1. 4. 1固体反硝化菌剂

P,=r. V1 m V2

5.7.4.1.4.2液体反硝化菌剂

5.7.4.1.5允许差

V2+V Vo V 2

取平行测定结果的算术平 的相对偏差不大于3.0%。

5.7.4.2亚硝态氧还原性能的测定

5. 7. 4. 2. 1培养基的制备

培养基中各物质浓度：葡萄糖1.0g/L；亚硝酸钠1.0g/L；磷酸氢二钾0.05g/L；七水合硫酸 镁0.1g/L；七水合硫酸亚铁0.2g/L。 于115℃土1℃下高压蒸汽灭菌20min。置于暗处保存，并在1个月内使用，使用前用碳酸钠溶 液或盐酸溶液调节溶液pH值在6.0~7.5，并用氮气置换至溶解氧浓度小于0.5mg/L。

5.7.4.2.2菌剂活化

固体菌剂活化：准确称取5.0g菌剂，加至盛有500.0mL培养基的1L三角瓶中，将三角瓶放 入恒温磁力搅拌水浴锅中，温度保持在30℃士1℃，开启磁力搅拌，控制溶解氧浓度小于 0.5mg/L，活化4h~12h。 液体菌剂活化：准确量取250.0mL菌剂，加至盛有250.0mL培养基的1L三角瓶中，将三角 瓶放入恒温磁力搅拌水浴锅中，温度保持在30℃土1℃，开启磁力搅拌，控制溶解氧浓度小于 0.5mg/L，活化4h~12h

5.7.4.2.3测定

HG/T59262021

5.7.4.2.4结果计算

5. 7. 4. 2. 4. 1固体反硝化菌剂

P.=r. m V2

5.7.4.2.4.2液体反硝化菌剂

5.7.4.2.5允许差

V。+ViV2+V P4=r. Vo V2

取平行测定结果的算术平均值为测定结果体育标准， 两次平行测定结果的相对偏差不大于3.

文平行测定结果的算术平均值为测定结果， 两次平行测定结果的相对偏差不大于3.0%

6.1本文件规定的全部指标为出厂检验项目。 6.2按每一发酵罐菌液（或每批固体发酵）加工成的产品为一批，每批产品不超过25t。 6.3按GB20287一2006中7.1的规定进行采样，总量不少于1000g（或1000mL）。将样品混匀， 分装于两个无菌、干燥的聚乙烯瓶或采样袋中，密封。瓶（袋）上贴标签，注明生产厂名、产品名 称、批号、采样日期和采样者姓名。一瓶（袋）供检验用，另一瓶（袋）保存3个月备查。 6.4检验结果按GB/T8170一2008规定的修约值比较法进行判定。 6.5检验结果中如果有指标不符合本文件要求，应重新自两倍量的包装单元中采样核验。核验结果 即使只有一项指标不符合本文件要求，则整批产品为不合格

7标志、包装、运输、购存

7.1反硝化菌剂包装袋或桶上应有牢固、清晰的标志，内容包括：生产厂名称、产品名称、商标、 净质量、批号、生产日期、本文件编号以及GB/T191一2008规定的“怕雨”“怕晒”“向上”标志。 7.2每批出厂的反硝化菌剂都应附有质量检验报告及质量合格证。 7.3液体反硝化菌剂采用聚乙烯或聚丙烯塑料桶包装，也可用贮罐装运。 7.4固体反硝化菌剂采用双层袋装或桶装，每袋（桶）净质量25kg、50kg或依顾客要求而定。 7.5反硝化菌剂在运输过程中，应有防日晒及防雨淋措施，并保持包装完整、标志清晰。装卸时应 轻搬轻放水利管理，防止包装破损。 7.6反硝化菌剂应存放在通风、阴凉、干燥的库房中，防止交叉污染。自生产之日起，液体产品贴 存期为6个月，固体产品存期为12个月。

按照HJ/T415的技术要求对反硝化菌剂进行环境安全评价，应不存在安全风险