A.2.2活芯气体采样器

包括真空泵、缓冲瓶、转子流量计和连接管

A.3.1便携式光度计或分光光度计。 A.3.2配套比色管

A.3.1便携式光度计或分光光度计。 A.3.2配套比色管

1室内游泳池空气中NCI路桥设计、计算，现场检测方法装置图

A.4.2DPD3试剂片，主要成分为F

L.4.2DPD3试剂片，主要成分为KI。

A.5.1用碱性肥皂清洗玻璃器血，再用去离子水进行润洗，置温度为180℃烘箱内干燥。 A.5.2向吸收器A和吸收器B分别加入15mL纯水，将两组DPD试剂片（每组包括DPD1和DPD3 两种试剂片)分别放人吸收器A和吸收器B中，并用玻璃棒轻轻振揭至完全溶解。 A.5.3选取氯消毒的室内游泳馆，在该游泳馆一天人流量最大时段将NCls现场检测装置的进气口置 于池边水面以上30cm处。如有条件也可以将进气口置于池中水面以上30cm处。 A.5.4开启真空泵，将抽气流量控制为1L/min，抽气时间为100min，总抽气量100L。 A.5.5将吸收器A内的吸收液倒人25mL容量瓶中，用少量纯水冲洗活芯气体采样器内壁，将残液倒 人容量瓶，并定容至25mL。容量瓶内待测液体称为溶液A。对吸收器B内的吸收液操作同吸收器A， 容量瓶内待测液体称为溶液B。 A.5.6在严格控制抽气量且NCl浓度在限定标准以下时，吸收瓶B的吸收液能完全吸收NCl3，溶液 A仅作空白参照。用配套的便携式分光光度计分别对溶液B和溶液A进行测定，结果分别为6值和 值。则化合氯值按式（A.1）计算

三氯化氮按式（A.2)计算！

A.7重复性和最低检测限

重复性为1.7%，最低检测限为3.6μg/m。

B.1抽气取样期间转子流量计的浮子应保持稳定。 3.2在氯消毒的室内游泳池中，NH.CI、NHCl2、CHsNCl2和O2会对实验结果造成干扰，这些化 所产生的干扰一般不大于15%。

附录B （资料性附录） 游泳池中异养菌平板计数法

异养菌平板计数法，即标准平板计数法，是一种测量水中活的异养细菌数目的方法。该方法被应用 于游泳池水的处理以及输配过程中微生物量的检测。成对、成链、丛生的，甚至是单个细胞，均被认定是 个菌落，这些都被计算在菌落数中。菌落数也受其成长过程中的相互影响。为了进行数据比较，应采 用同样的培养步骤和培养基

筛选方法如下： a）倾倒平板法：它针对体积在0.1mL2.0mL的水样或稀释水样。该方法形成的菌落较小而 紧实，与表面生长的菌落相比，它们之间更不容易产生干扰。另一方面，培养基中的菌落通常 生长缓慢并且难以转移。恒温水浴对培养基控温至关重要。 b） 涂布平板法：涂布平板法不会形成热冲击，并且形成的菌落易于区分。该方法形成的菌落转移 方便，菌落形态学特征清晰，易于分辨和对比。这种方法要求被测水样或稀释水样体积小，仅 为0.1mL～0.5mL，具体的体积取决于预倾倒平板的干燥程度。采用此方法，需要维持适当 的预干燥及具有吸收能力的培养基。 C 膜过滤法：膜过滤法适用于大样品量低浊度水样的检测，以及细菌含量较低（<1CFU/mL~ 10CFU/mL)的水样。该法不需要加热，但增加了膜片的成本支出。该法的缺点是，显示区域 较小，需要反射光进行菌落计数，过滤压力容易对细胞造成损伤，膜片质量存在的差异等。 d 酶底物法：酶底物法通常用于样品的细菌浓度范围很大的情况。该法采用的培养基主要是微 生物酶水解形成的底物，该培养基在35℃培养48h后达到甲基伞形酮释放峰值。甲基伞形 酮在紫外线照射下呈现荧光特性。荧光亮度高的位置，其相应细菌浓度也较高。该法不能直 接提取菌落

水样采集后尽快进行分析，以减小细菌数量的变化。水样来集与分析之间的最大间隔时间为8h （水样转移的时间6h，检测时间2h）。如果取样8h内无法进行检测，需将水样置于在4℃冷藏，采样 和分析时间间隔不应超过24h。

平板最者耀板时，应采用无菌坡璃， （57cm"）。采用快速的上

依据EPA标准，倾倒平板应在35℃下培养48h。否则，应该选择建议的培养时间和温度去检测水 质的变化。通常情况下，在20℃～28℃条件下，培养5d～7d能够得到最大菌落数。在培养过程中， 需要保持培养器中的湿度，以减少培养基的水分散发。对于长期培养，该步骤至关重要。可以将热水置 于培养器底部，用于保持培养器温度。考虑到防止培养器锈蚀时，可以用塑料膜对培养血进行密封来达 到保温效果

B.1.8.1倾倒、涂布平板法：

3.十倾倒、保布平板法： a）培养结束后立即对培养血中菌落数量进行统计。否则，应将培养血置于5℃10℃环境下保 存，但保存时间应不超过24h，同时，应尽量避免此类操作。做好每个样品的灭菌控制记录。 b） 菌落计数时，应用菌落计数器手动计数。也可使用自动计数设备，但应对自动计数器进行校 正，以保证数据的准确性。 c）培养皿制备时，调整水样体积，以保证培养后的菌落数处于30～300。 d）通常移至培养基中的水样不超过2.0mL。如果2.0mL水样形成的菌落数低于30个，则可以 视情况增加水样移取量。单位体积的菌落数按照式（B.1)计算：

式中： n——单位体积的菌落数,单位为菌落数每毫升(CFU/mL);

N一一菌落数量，单位为菌落数（CFU)； V一一接种水样体积，单位为毫升（mL）。 注1：如果不同稀释倍数培养基菌落数不在30个～300个范围内，或一个或多个培养皿的菌落数大于300个，则以 最接近300个的培养皿计数。最终以CFU/mL为单位撰写报告。 注2：如果所有稀释倍数均无菌落产生，应按<1/试样体积”记录。例如，如果0.01mL体积水样中无菌落形成，应 按<100CFU/mL计 注3：如果培养的菌落形成数量均超过300个，且密度超过10个/cm，对13个计数格内的菌落数量进行统计。 选取7个垂直相连计数格及6个水平的计数格进行统计。按下法进行估计：对于65cm"的玻璃培养皿，菌落 数量=13个单位计数格菌落数量×5，对于57cm的玻璃培养皿，菌落数量=19个单位计数格菌落数量×3， 如果培养血菌落计数数量均大于100/cm"，报告结果按“>最小稀释倍数培养基菌落数量/最小稀释倍数接科 的试样体积文稀释倍数”表示。 注4：如果菌落在培养皿上发生了杂菌污染，则仅对清晰分辨的部分进行计数。发生污染的区域不应超过整个培养 皿面积的一半，否则为无效数据。 e）对于杂菌数量，按照下列形式进行计数：由菌落分解形成的链状菌落；在琼脂和培养皿底部之 间呈胶片状生长的菌落；在边界或琼脂表面形成的菌落。后两种菌落主要是由于菌落形成大 量湿气积累所致。 f 当菌落之间的距离与最小菌落直径大致相等时，视其为独立菌落。相互重叠的在形态上完全 不同的菌落，也视为独立菌落。 名） 如果培养皿的杂菌污染过于严重，应标注“杂菌污染”。如果由于稀释倍数错误或其他原因，应 标注“实验事故（LA)”。 3.1.8.2 膜过滤法： a） 对膜上的菌落用立体显微镜在10～15倍放大倍数下计数。最好将培养皿在显微镜台上45°倾 斜放置，并调整光源垂直菌落照射。每个滤膜的菌落密度宜在20～200。如果菌落较小，且没 有重叠，则待检的菌落密度限值可以相应提高。 b）如果单位面积的菌落数量≤2，对膜上所有的菌落进行计数。当单位面积的菌落数量为3个～10个 时，对10个单位面积的菌落数量进行计数并取其均值。当单位面积的菌落数量在10个～20个 时，对5个单位面积的菌落数量进行计数后取均值。用单位面积上的菌落数乘100后除以样 品体积即可算出每100mL水样中可形成的菌落数量。对于单位面积菌落数量大于20的情 况，应按“>2000/水样体积”记录。用平均菌落数量统计菌落形成单位。并且只对独立、分散 的菌落进行计数。 3.1.8.3酶底物法：见B.5.6

B.1.9统计、计数报告

统计、计数报告如下： a） 菌落数量统计均应按菌落形成单位（CFU)记。此外，报告还需要记录方法、培养温度、时间以 及培养基类型。例如：CFU/mL，平板计数法，35℃/48h，平板计数琼脂。 b 异养菌倾倒平板法、涂布平板法、膜过滤法的细菌浓度以单位体积水样形成菌落表示（CFU/mL）。 酶底物法，应从MPN表选择MPN数值，并对不同稀释倍数做出调整。记录水样体积、每个培 养血的菌落数量。如果将平血得到的结果在记录之前进行平均计算，在换算成菌落数时应保 留两位有效数字。 c）对数据进行四舍五人，如将142记录为140，将155记录为160，但是仍然将35记录为35。

差别大于5%或两个工作人员对同一个培养皿两次计数结果差别大于10%，应重新读数，

B.2.1取样和预处理

见B.1.4、B.1.5.

样品稀释方法如下： 稀释倍数的选择：根据经验，选择的稀释倍数，应使培养基的菌落数在30～300。 b）样品测试：在提取待测样品时需用无菌移液管，且不同稀释浓度之间用不同的移液管，不可混 用。不要在阳光直射下做稀释准备以及倾倒平板操作。将移液管移出容器时，应小心避免污 染。注意吸取试液的时候插入水样深度不要超过2cm～3cm。 C 稀释样品测试：当排出移液管液体的时候，应保持移液管处于45°倾斜状态，同时管头应轻轻接 触培养血底部或稀释器皿的瓶口处，培养皿接种时应将培养皿盖打开至刚好能将移液管插入 的状态。待液完全流出后，将移液管管头轻触培养血底部干燥处，使残液顺利流出。当需要接 种试样容量小于0.1mL时，应采取倍数稀释（如高浊度水或污水）。对每一个稀释倍数或试样 体积，都应做一组平行对照。对加入试样的培养血，小心加入培养基并小心混匀。从开始移液 至倾倒平板应保证在20min内完成。

样品稀释方法如下： a） 稀释倍数的选择：根据经验，选择的稀释倍数，应使培养基的菌落数在30～300。 b 样品测试：在提取待测样品时需用无菌移液管，且不同稀释浓度之间用不同的移液管，不可混 用。不要在阳光直射下做稀释准备以及倾倒平板操作。将移液管移出容器时，应小心避免污 染。注意吸取试液的时候插入水样深度不要超过2cm～3cm。 C 稀释样品测试：当排出移液管液体的时候，应保持移液管处于45°倾斜状态，同时管头应轻轻接 触培养血底部或稀释器皿的瓶口处，培养皿接种时应将培养盖打开至刚好能将移液管插入 的状态。待液完全流出后，将移液管管头轻触培养血底部干燥处，使残液顺利流出。当需要接 种试样容量小于0.1mL时，应采取倍数稀释（如高浊度水或污水）。对每一个稀释倍数或试样 体积，都应做一组平行对照。对加入试样的培养血，小心加入培养基并小心混匀。从开始移液 至倾倒平板应保证在20min内完成。

融化培养基：在密闭环境下，用沸水或蒸汽融化培养基，避免长期处于高温环境下。不要二次 灭菌培养基。不使用含有沉淀的培养基。在使用前需将培养基置于44℃～46℃水浴中，且 最好不要超过3h。在一个独立的容器内放置一支温度计监测温度，而不要仅凭触觉判断。 b）倾倒平板：为确保从稀释到最后一个样倾倒完成整个接种过程不超过20min（最好不超过 10min)，应控制每一次接种的试样数量。每个接种过的培养血，倒入水浴保存的培养基 10mL12mL（同样保证培养皿开口刚好够倾倒培养基）。小心避免培养基酒出。此外，在 倾倒培养基的时候应先用纸巾吸干水分。确保培养血壁面清洁，无残留污染物。将培养血放 置于水平面上凝固。凝固后，将培养皿倒置于培养箱中培养。 c）空白对照：培养过程中，检查空白对照组是否生成菌落，以推测样品是否发生杂菌感染。

B.2.5计数、记录、分析、报告

见 B.1.8、B.1.9.

B.3.1样品及预处理

试验材料如下： a）直径4mm，长200mm，从一端40mm处开始弯曲45°的玻璃棒；使用前应经灭菌处理。 b）移液管：1.0mL玻璃或塑料移液管。 c）42℃培养皿或干燥箱，或无菌台

使用R2A培养基时，在28℃环境下培养5d～7d。如果使用NWRI培养基，在20℃环境下培养

15mL火培尔基直于100mmX5mm90mmX15mm的菌培券中，得原脂指固后，格 培养皿倒置，进行干燥处理，这样处理后大约会蒸发掉2g～3g的水分。干燥后的培养皿可以立即使 用，也可以在密封塑料袋4℃保存并在2周内使用。如需干燥后立即使用，可在排烟柜中室温下（24℃～ 26C）加25mL培养基干培养Ⅲ

流程如下： a）样品稀释见B.2。 b） 玻璃棒：移液管移取0.1mL或0.5mL试样于预干燥的培养基表面。用灭菌弯曲玻璃棒，通过 用手旋转培养基将水样均匀涂布于培养皿上，完成接种。待培养基完全吸收菌液后进行培养。 移液管。将培养基置于旋转台上旋转，同时用移液管移取适量试样悬于预干燥培养基表面，移 液管从中心开始至距培养皿壁0.5cm止，线性往复运动并缓慢滴加试样。待培养基完全吸收 菌液后进行培养。

B.3.7计数、记录、分析、报告

见B.1.8、B.1.9

B.4.1样品及预处理

见B.1.4、B.1.5.

移取5mL灭菌培养基于50mmX9mm培养皿中，室温下凝固，然后倒置于塑料箱等容器中进 截，冷藏时间不超过2周。

不同细菌浓度的水样，采用不同的样品体积，最大样品容量使每张滤膜形成的菌落娄 200个。

B.4.8计数、记录、分析、报告

见B.1.8、B.1.9。报告以CFU/mL为单位记录菌落数，同时要记录膜过滤的方法，时间以及培养 型等信息。

B.5.1样品及预处理

见 B.1.4 和 B.1.5。

见 B.1.4 和 B.1.5.

试验材料如下： a) 经灭菌的带刻度玻璃或塑料移液管，体积分别为0.1mL、1.0mL和10mL。 b）35℃±0.5℃的恒温培养箱。 c）紫外光源,6W,365μm。 d)培养Ⅲ

培养基要求如下： 可以采用100mL多次使用培养基，或10mL单次使用培养基。培养基储藏温度为2℃～25℃， 通常来讲这种培养基只有12个月的有效期。 b） 采用10mL培养基进行空白接种，然后在35℃培养48h，如果没有菌落形成，则说明培养基 没有被杂菌污染，可以使用，

使用去离子水、蒸馏水、缓冲蒸馏水或0.1%蛋白陈。

使用去离子水、蒸馏水、缓冲蒸馏水或0.1%蛋白

CI/T 2442016

纯水水化培养基至100mL标线，盖盖，摇匀至培养基完全溶解，无菌条件下移取1.0mL试样和 9mL水化培养基于培养皿正中（或0.1mL试样和9.9mL水化培养基）。 注：最终试样和培养基的体积应保证在10mL士0.2mL。培养皿盖盖，轻轻播晃均布混合液。将培养基旋转90~ 120°倾倒出多余培养液，接种后在35℃培养48h(45h～72h）。如果估计试样细菌浓度超过738CFU/mL，则 应通过向99mL无菌培养液中添加1mL样品对试样进行稀释，以保证其细菌浓度低于738CFU/mL。 B.5.6计数、记录、分析、报告 培养后，用UV灯在培养血上方13cm处对培养皿进行检查，观察是否有荧光出现，出于安全考虑， 此过程需佩戴防UV眼镜。用MPN表格计数，并以MPN/mL表示，

B.5.6计数、记录、分析、报告

过氧化氢（H2O2）含量的测定： a）配制2mol/L硫酸与100g/L硫酸锰等溶液。另外配制并标定0.02mol/L高锰酸钾滴定液。 b）精密吸取样品适量，使其相当于过氧化氢约0.3g，于100mL容量瓶中用蒸馏水稀释至刻度， 混匀。 取过氧化氢稀释液10.0mL，置100mL碘量瓶中，加人2mol/L硫酸20mL与100g/L硫酸 锰3滴，摇匀。用0.02mol/L高锰酸钾滴定液（装于25mL滴定管中）滴定至溶液呈粉红色， 记录高锰酸钾滴定液用量。重复测2次，取2次平均值进行以下计算。 d 因1mol/L高锰酸钾滴定液1mL相当于0.08505g过氧化氢，可按式(C.1)计算过氧化氢 含量。

过氧化氢含量，单位为克每升（g/L)； 一高锰酸钾滴定液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L)； Vp——为锰酸钾滴定液体积，单位为毫升(mL)； 碘量瓶中所含过氧化氢样液体积，单位为毫升（mL)

附录D （规范性附录） 游泳池中氰尿酸检测方法

0.1.1本方法适用于测定游泳池池水中残留氰尿酸。 D.1.2本方法适用于游泳池水中氰尿酸质量浓度为5mg/L～50mg/L的水样直接测定。浓度超过 50mg/L的水样须经稀释后方可测定

氰尿酸测试采用比浊测定法。粉末试剂（氰尿酸2号试剂)与水中氰尿酸反应后，生成颗粒物 颗粒物形成的浑浊度与氰尿酸浓度成正比，在480nm的波长下测定浑浊度

D.3.1粉末试剂（氰尿酸2号试剂）。 D.3.2氰尿酸标准贮备溶液：准确称量1000g氰尿酸，溶于去离子水，移人1000mL容量瓶中，用水 稀释至标线，摇匀；制成质量浓度为1000mg/L的氰尿酸标准贮备溶液。 D.3.3氰尿酸标准使用溶液：准确吸取3mL氰尿酸标准贮备溶液100mL容量瓶中，用去离子水稀释 至标线，摇匀：制成质量浓度为30mg/L的氰尿酸标准使用溶液。

石化标准D.4.1分光光度计。

洁净的玻璃瓶或塑料瓶取样，采集的样品须在24

D.6.1使用配制的氰尿酸标准使用溶液（质量浓度为30mg/L)对标准曲线进行修正。 D.6.2选择仪器菜单里的“选项”菜单，进人“选项”菜单里的“调整与精度”子菜单，按下“调整”键。 D.6.3按下“确认”键，确认显示的浓度。如果使用代替浓度，按下“调节”菜单下的数字键，输人实际浓 度，并按下“确认”键，

“清零”键。此时显示0.00。 D.7.2在另一个25mL比色池中倒人25mL待测样品，再加人一份粉末试剂，摇匀，反应3min。在 反应结束后的7min内，将比色池放人分光光度计中，盖上器具盖，按下仪器的“读数”键，仪器将显示测 定水样中氰尿酸的质量浓度（以mg/L为单位）。 注：反应时如有氰尿酸存在，会产生白色浑浊物。分析前应除去高浑浊物。

“清零”键。此时显示0.00。 D.7.2在另一个25mL比色池中倒人25mL待测样品，再加入一份粉末试剂，摇匀，反应3min。在 反应结束后的7min内，将比色池放人分光光度计中，盖上器具盖，按下仪器的“读数”键，仪器将显示测 定水样中氰尿酸的质量浓度（以mg/L为单位）。 注：反应时如有氰尿酸存在，会产生白色浑浊物。分析前应除去高浑浊物。

采用10mg/L放人氰尿酸标准溶液进行测试，结果为：氰尿酸程序，95%置信度区间内，7mg/L mg/L。

灵敏度分析见表D.1。

表 D.1 灵敏度分析

旅游标准打印日期：2016年9月6日F009B