4.2基因组DNA核酸类样本质量要求

4.2.1基因组DNA完整性

基因组DNA是组成生物基因组的所有DNA。其完整性应符合凝胶电泳主带单一，在23kb2 清晰条带，且样本无严重降解。如主带不清晰绿色建筑标准规范范本，弥散现象严重则为严重降解。完整性检测图谱见限 中A.1。

4.2.2基因组 DNA样本浓度

单位体积的液体里含核酸的量， 可使用质量浓度（ng/μL）表示。基因组DNA浓度低于0.5ng/μL 时仪器检测精度不够且影响文库构建的成功率，不同文库构建类型和不同高通量测序仪对样本浓度要 求不同样本浓度应大于0.5 ng/uL

4.3总RNA核酸类样本质量要求

4.3.1总RNA完整性

总RNA是从基因组转录出来的所有转录产物。包括信使RNA、核糖体RNA及一些与转录调控、 转录后加工及转录后翻译有关的非编码RNA。可通过总RNA的检测确定RNA的完整性。 RNA样本的完整性宜通过微流控或自动化凝胶电泳分析总RNA的RIN值以及rRNA的28S 8S或23S/16S比值进行判断（其中原核生物应使用23S/16S数值进行判断，真核生物应使用28S/18S 效值进行判断），真核生物又分为人、动物，植物、真菌和昆虫这三类作不同要求。不同物种的总RNA 完整性要求见表1。微流控分析检测图谱见A.2~A.5

表1总RNA样本质量要求

4.3.2总RNA核酸类样本浓度

总RNA样本浓度低于 响RNA文库构建的成功率，不同文 类型和不同高通量测序仪

5.1.1凝胶电泳仪。琼脂糖凝胶电泳相关设备及仪器！ 5.1.2微流控电泳分析仪

5.1.1凝胶电泳仪。琼脂糖凝胶电泳相关设备及仪器

3定量荧光计：可配合荧光染料检测试剂快速完成核酸浓度的读取，最低应能检测0.2ng/μL的 羊本。

5.1.3定量荧光计：可配合荧光染料检测试剂快 该酸浓度的读取，最低应能检测0.2ng/uL的核 酸样本。

5.2核酸类样本质量检测方法

5.2核酸类样本质量检测方法

5.2.1基因组DNA核酸类样本的检测方法

采用凝胶电泳法检测DNA核酸样本的完整性，宜使用1%浓度的琼脂糖凝胶进行电泳，电 V，电泳时间30min；采用荧光染料法进行核酸浓度的检测，按照对应的荧光染料检测试剂流程 作

5.2.2总RNA核酸类样本的检测方法

采用微流控电泳或自动化凝胶电泳分析法检测总RNA核酸样本的完整性，具体操作参考微流控 电泳或自动化凝胶电泳的操作说明；常规样本宜采用荧光染料法进行总RNA浓度的检测，微量样本宜 采用微流控电泳或自动化凝胶电泳分析法检测总RNA的浓度

A.1基因组 DNA样本完整性检测

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附录A （资料性） 核酸类样本完整性检测示例图

凝胶电泳检测基因组DNA样本完整性结果见图A.1。泳道2、泳道3的样本降解严重，高通量 字结果碱基测序准确率低于99%

电泳检测基因组DNA样本完整性结果见图A.1。泳道2、泳道3的样本降解严重，高通量测 基测序准确率低干99%

A.2原核总RNA样本完整性检测

图A.1凝胶电泳检测结果

图A.1凝胶电泳检测结果

微流控电泳检测原核总RNA样本完整性结果见图A.2 注：RIN>7.23S/16S>1.图谱基线呈直线

物总RNA样本完整性检

微流控电泳检测植物总RNA样本完整性结果见图A.3， 注：RIN>6.28S/18S1.图谱基线呈直线

图A.2原核样本微流控电泳检测结果

微流控电泳检测植物总RNA样本完整性结果见图A.3， 注：RIN>6.28S/18S1.图谱基线呈直线

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A.4昆虫总RNA样本完整性检测

微流控电泳检测昆虫总RNA样本完整性结果见图A.4 注：18S主带清晰广场标准规范范本，图谱基线呈直线

图A.3植物样本微流控电泳检测结果

微流控电泳检测昆虫总RNA样本完整性结果见图A.4 注：18S主带清晰，图谱基线呈直线

A.5动物总RNA样本完整性检测

图A.4昆虫样本微流控电泳检测结果

防雷标准规范范本微流控电泳检测动物总RNA样本完整性结果见图A.5 注：RIN>7.28S/18S>1.图谱基线呈直线

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图A.5动物样本微流控电泳检测结果