胰蛋白陈：20g 乳糖：5g 3号胆盐或混合胆盐：1.5g 磷酸氢二钾：4g 磷酸二氢钾：1.5g 氯化钠：5g 蒸馏水：1000mL

中，置高压蒸汽灭菌器，115℃高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。

路桥施工组织设计 蛋白陈：10g 乳糖：10g 磷酸氢二钾：2g 琼脂：20~30g 蒸馏水：1000mL 2%伊红水溶液：20mL 0.5%美蓝水溶液：13m

5.4.2储备培养基的制备

使之浴解，书 蒸馏水补足至1000mL，pH值调整为7.2～7.4。趁热用脱脂棉或多层纱布过滤，再加入乳糖，混匀 后定量分装于锥形瓶内，置高压蒸汽灭菌器中，115℃灭菌20min，储存于冷暗处备用。

5.4.3平血培养基的配制

将按5.4.2制备的储备培养基加热融化，无菌操作，根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按 比例分别吸取已灭菌的2%伊红水溶液和0.5%美蓝水溶液，加人已融化的储备培养基内，并充分混 匀（防止产生气泡），待其冷却至44.5℃后立即将此种培养基适量倾入于已灭菌的空平皿内，待其冷 却凝固后，倒置于冰箱内备用，

结晶紫溶液：结晶紫乙醇饱和溶液（取结晶紫约4～8g，溶于95%乙醇100mL中）20mL， 俊铵溶液80mL，将两种溶液混合，过滤，

6.2助染剂 碘：1g 碘化钾：2g 蒸馏水：300mL 将碘与碘化钾先行混合，加人少许蒸馏水，充分振摇，待完全溶解后再加人其余的蒸馏水，当溶 液由棕黄色变为淡黄色时即应弃取，

7.1水样的采集和保存

7.1水样的采集和保布

采样瓶使用500mL已灭菌的磨口玻璃塞广口瓶，采集水样时，应避免瓶盖及瓶子颈部受杂菌 污染。 灭菌后的采样瓶2周内未使用、需重新灭菌

采集好的水样需放置约4℃冷藏设备内保存运输。一般要求在采集4h内测定。 水样接种量

接种水样总量300mL：在2个装有已灭菌50mL浓乳糖蛋白陈培养液的大试管或锥形瓶中（内有 ，以无菌操作各加入水样100mL；在10支装有已灭菌5mL浓乳糖蛋白陈培养液的试管中（内 ），以无菌操作各加入水样10mL

7.2.2受到不同程度污染的水

将水样充分混匀后，根据水样污染程度确定水样接种量。每个水样至少用3个不同的水样量接 种。同一接种量要有5管。 未受污染的水样接种量为10mL、1mL、0.1mL。受污染水样接种量应根据污染程度加大稀释 度，可接种1mL、0.1mL、0.01mL或接种0.1mL、0.01mL、0.001mL等。 如果体积为10mL，则试管内应装有浓乳糖蛋白陈培养液5mL；如接种量不多于1mL，则可接种 于乳糖蛋白陈培养液10mL中。使用的水样量可参考表1

表1接种用水量参考表

以接种水样量10mL、1mL、0.1mL为例： 于各装有5mL浓乳糖蛋白陈培养液的5个试管中（内有倒管），以无菌操作各加人10mL水样； 于各装有10mL乳糖蛋白陈培养液的5个试管中（内有倒管），以无菌操作各加人1mL水样；于各装 有10mL乳糖蛋白陈培养液的5个试管中（内有倒管），以无菌操作各加人1mL1：10稀释水样。共 计15管，3个稀释度。

纺织标准将已接种的水样混勾后置于37℃恒温内培养24h士2h。产气和产酸的发酵管表明试验阳性。如果

表3燕大肠菌群最可能数（MPN）检数表

水样总量55.5mL，其中5份10mL、5份1mL、5份0.1mL

9.2试验过程中所用玻璃器皿均应要求无菌。 9.3带菌培养基应灭菌后再弃去，其他遵守实验室安全制度。 9.4检验开始前应充分振摇混合水样，以保证粪大肠菌群数量的准确性。 9.5对于污染严重的水样，为了保证在接种后得到一个合适范围的阳性结果，应设置不少于4个的 连续稀释度；当4个连续稀释度的最低管或全部呈现阳性，应加大稀释度。 9.6若复发酵试验阳性结果明显，平板分离试验可以省略

9.2试验过程中所用玻璃器皿均应要求无菌。 9.3带菌培养基应灭菌后再弃去，其他遵守实验室安全制度。 9.4检验开始前应充分振摇混合水样，以保证粪大肠菌群数量的准确性。 9.5对于污染严重的水样，为了保证在接种后得到一个合适范围的阳性结果，应设置不少于4个的 连续稀释度；当4个连续稀释度的最低管或全部呈现阳性公厕标准，应加大稀释度。 9.6若复发酵试验阳性结果明显，平板分离试验可以省略

中华人民共和国水利行业标准 水质粪大肠菌群的测定——多管发酵法 SL 3552006